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細胞凋亡

Annexin V, TRITC標記

產品編號:E0203       CAS#:       Ex (nm):541 Em(nm):            分子式: 分子量:E0203        溶劑:Water        包裝:100test 供貨狀態:3-5天        儲存條件:低溫避光-20 零售價格: 2544.00

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產品描述

膜聯蛋白V是研究細胞凋亡的有價值的工具。它用作檢測在細胞表面表達磷脂酰絲氨酸的細胞的探針,這是細胞凋亡以及其他形式的細胞死亡中發現的特征。有多種參數可用于監測細胞活力。Annexin V-dye共軛物被廣泛用于通過測量磷脂酰絲氨酸(PS)的轉運來監測細胞凋亡。在細胞凋亡中,PS轉移到質膜的外部小葉。磷脂酰絲氨酸在細胞表面的出現是細胞凋亡初始/中間階段的普遍指標,可以在觀察形態變化之前進行檢測。這種熒光TRITC-Annexin V偶聯物廣泛用于通過流式細胞儀或熒光顯微鏡監測細胞凋亡。對于基于膜聯蛋白V的細胞凋亡檢測的微孔板檢測,我們建議您使用Cell Meter?試劑盒。

 

產品編號

產品名稱

規格

價格

E0203

   Annexin V, TRITC標記

100 tests

2544RMB

操作步驟

1.用膜聯蛋白V綴合物制備和孵育細胞:

1.1     制備膜聯蛋白V綴合測定緩沖液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl 2,pH 7.4。

1.2     用測試化合物處理細胞一段所需的時間(用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時)以誘導細胞凋亡。

1.3     離心細胞,得到1-5×10 5個細胞/管。

1.4     將細胞重懸于200μLAnnexin V結合測定緩沖液中(來自步驟1.1)。

1.5     在細胞中加入2μL膜聯蛋白V結合物。

可選:在細胞內加入死細胞染色劑如碘化丙錠,用于壞死細胞。

1.6     余ncubate在室溫下進行30至60分鐘,避光。

1.7     在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前,加入300μLAnnexin V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)以增加體積(參見下面的步驟1.8)。

1.8     使用流式細胞儀或熒光顯微鏡監測熒光強度(參見下面的步驟2或3)。

2.使用流式細胞儀分析:

通過使用具有適當過濾器的流式細胞儀來量化膜聯蛋白V綴合物。

注意:粘附細胞上的膜聯蛋白V 結合流式細胞術分析未經常檢測,因為在細胞分離或收獲期間可能發生特定的膜損傷。

3.使用熒光顯微鏡分析:

3.1     移液器從步驟1.6,將細胞懸浮液沖洗1-2次用甲nnexin V-結合測定緩沖液(來自步驟1.1) ,然后與A重懸細胞 nnexin V-結合測定緩沖液(來自步驟1.1) 。將細胞添加到蓋有玻璃蓋玻片的載玻片上。

注意:對于粘附細胞,建議直接在蓋玻片上生長細胞。與膜聯蛋白V綴合物(步驟1.6)孵育后,用Nnexin V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)沖洗1-2次,并將A nnexin V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)加回到蓋玻片中。在玻璃載玻片上翻轉蓋玻片并觀察細胞。在與膜聯蛋白V綴合物孵育后,細胞也可以在2%甲醛中固定,并在顯微鏡下觀察。

3.2     在熒光顯微鏡下用適當的濾光片分析膜聯蛋白V綴合物的凋亡細胞。



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