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細胞凋亡

Cell Meter APC-Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒 適合于流式細胞儀

產品編號:E0701       CAS#:       Ex (nm):651 Em(nm):            分子式: 分子量:E0701        溶劑:        包裝:100test 供貨狀態:3-5天        儲存條件:低溫避光-20 零售價格: 2544.00

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產品描述

膜聯蛋白V可以與包括APC的熒光染料綴合。這種形式保留了其對磷脂酰絲氨酸(PS)的高親和力,因此可用作流式細胞儀分析正在經歷細胞凋亡的細胞的敏感探針。由于PS的外化發生在細胞凋亡的早期階段,APC膜聯蛋白V染色可以在比基于核變化(例如DNA片段化)的測定更早的階段鑒定細胞凋亡。 APC膜聯蛋白V染色先于膜完整性的喪失,這伴隨著由細胞凋亡或壞死過程引起的最新細胞死亡階段。因此,APC膜聯蛋白V染色通常與重要染料如碘化丙啶(PI)或7-氨基放線菌素(7-AAD)聯合使用,以使研究人員能夠識別早期凋亡細胞(7-AAD陰性,APC)膜聯蛋白V陽性)。具有完整膜的活細胞排除7-AAD,而死亡和受損細胞的膜對7-AAD是可滲透的。例如,被認為存活的細胞是APC膜聯蛋白V和7-AAD陰性,而早期細胞凋亡的細胞是APC膜聯蛋白V陽性和7-AAD陰性,而晚期凋亡或已經死亡的細胞都是APC膜聯蛋白V和7-AAD陽性。該測定不區分經歷凋亡性死亡的細胞與由于壞死途徑而死亡的細胞,因為在任一情況下,死細胞將用APC膜聯蛋白V和7-AAD染色。然而,當隨時間測量細胞凋亡時,通??梢詮腁PC膜聯蛋白V和7-AAD陰性(存活或無可測量的細胞凋亡)追蹤細胞,APC膜聯蛋白V陽性和7-AAD陰性(早期細胞凋亡,膜完整性存在) )最后到APC膜聯蛋白V和7-AAD陽性(末期凋亡和死亡)。細胞通過這三個階段的運動表明細胞凋亡。相比之下,單個觀察結果表明細胞本身是APC膜聯蛋白V和7-AAD陽性,它們揭示了關于細胞經歷其死亡的過程的較少信息。

 

產品編號

產品名稱

規格

價格

E0701

Cell Meter APC-Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒 適合于流式細胞儀

100 Tests

2544RMB

儲備溶液配制

1. APC-Annexin V原液(100X):
將含有0.2%BSA的200μLPBS加入到APC-膜聯蛋白V綴合物(組分A)的小瓶中并充分混合以制備100X APC-膜聯蛋白V儲備溶液。 注意:將重構的100X APC-Annexin V儲備溶液儲存在4 ℃。 除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣,并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。

操作步驟

1.用測試化合物處理細胞一段所需的時間(用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時)以誘導細胞凋亡。注意:膜粘附細胞的膜聯蛋白V流式細胞術分析未經常檢測,因為在細胞分離或收獲期間可能發生特定的膜損傷。

2.離心細胞,得到1-5×105個細胞/管。

3.將細胞重懸于200μL測定緩沖液(組分B)中。

4.向細胞中加入2μL100XAPC-膜聯蛋白V原液。

5.可選:將2μL100X碘化丙啶(組分C)加入細胞中,用于壞死細胞。

6.在室溫下孵育20至60分鐘,避光。

7.可選:在使用流式細胞儀分析細胞之前,添加200至300μL的測定緩沖液(組分B)以增加體積。

8.使用具有FL4通道的流式細胞儀(Ex / Em = 635 / 660nm)監測APC-膜聯蛋白V的熒光強度。當碘化丙啶加入細胞時,使用FL2通道測量細胞活力。



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