Cell Navigator 溶酶體標記(綠色熒光)試劑盒

該特定試劑盒設計用于在Ex / Em =445/503nm處以大斯托克斯位移的綠色熒光標記活細胞的溶酶體。該試劑盒使用專有的溶解性染料，可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。溶致指示劑，一種疏水性化合物，很容易滲透完整的活細胞，并被困在溶酶體內。進入溶酶體后，其熒光顯著增強。這一關鍵特征顯著降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該套件提供所有必要組件。 它適用于懸浮細胞和貼壁細胞。

操作方法

1.準備溶酶體染色溶液：

1.1解凍 Lysolite Green（組分A）至室溫。

1.2通過將20μLLysolite Green（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μLLysolite Green（組分A）就足夠了。 將未使用的Lysolite Green（組分A）等分并儲存在<-20℃。 避光，避免反復凍融循環。

注2：熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO₂培養箱中孵育30分鐘至2小時。使用配有FITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1,000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱的生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO₂培養箱中孵育30分鐘至2小時。使用配有FITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色（見步驟2.1）。